El CE bioquímico rápido el reactivo de la digestión 5-15 Min Enzyme BsaI de la DNA aprobó

Enzimas BsaI

las enzimas son series de enzimas dirigidas de la restricción para la digestión rápida de la DNA en 5-15 enzimas mínimas se pueden utilizar para digerir los productos del plásmido, genomic y virales de la DNA así como de la polimerización en cadena. Todas las enzimas muestran actividad superior en el almacenador intermediario universal, así que simplificaron el sistema de reacción enzimático de la digestión. Por otra parte, las enzimas proporcionan redundancia excelente de la enzima, permitiendo la digestión fácil de las plantillas exceso o difíciles del substrato.

Envío y almacenamiento

Los componentes se envían con la bolsa de hielo y se pueden almacenar en -20°C durante 2 años.

Cortar el sitio

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Condiciones recomendadas de la reacción

Almacenador intermediario de 1× FuniCut™; Incube en 37℃.

Inactivación termal

Incubación en 80℃ para 20 mínimos.

Control de calidad

1. Definición de la actividad: 1 DNA del μg pPIC9K fue digerida totalmente con 1 μL de la enzima en el minuto 15 en 37℃ en un volumen total de la reacción del μL 20.

2. Análisis prolongado de la actividad de la incubación/de la estrella: Ninguna degradación perceptible de 1 DNA del μg pPIC9K debido a la contaminación de la nucleasa o a la actividad de la estrella ocurrió durante la incubación con 1 μL de FuniCut™ BsaI para 3 horas en 37℃. Una incubación más larga puede dar lugar a actividad de la estrella.

3. Ligadura y Recleavage (L/R) análisis: Después de digerido con la enzima 1μL bajo condición óptima, recicle el producto de la digestión puede ser ligado debajo de ligasa de la DNA T4 en 22℃. El producto de la ligadura se puede recleavaged por la enzima.

4. Actividad no específica del Endonuclease: La incubación de 1 enzima del μL con 1 DNA supercoiled μg del plásmido por 4 horas en 37℃ dio lugar a ningún cambio de la condición supercoiled.

Instrucciones

1. Protocolo para la digestión rápida de diversa DNA

1,1 cosechadora que los componentes siguientes de la reacción en el hielo en el orden indicaron:

[Nota]: productos purificados *For de la polimerización en cadena. La cantidad de almacenador intermediario de 10× FuniCut™ se puede reducir al μL 2 debido a la fuerza iónica restante en los productos sin purificar de la polimerización en cadena. El producto de la polimerización en cadena fue recomendado para ser digestión anterior purificada cuando el producto de la polimerización en cadena será utilizado para reproducirse.

1,2 mezcla suavemente (hacer no vórtice) y vuelta abajo.

1,3 incube en 37℃ para el minuto 15 (DNA del plásmido) o para el minuto 15-30 (producto de la polimerización en cadena) o para el minuto 30-60 (DNA genomic).

1,4 opcional: Desactive la enzima calentando para el minuto 20 en 80℃.

2. Digestión doble y múltiple de la DNA

2,1 utilice 1 μL de cada enzima y aumente proporcionalmente las condiciones de la reacción apropiadamente.

2,2 el volumen combinado de las enzimas en la mezcla de reacción no debe exceder de 1/10 del volumen total de la reacción.

2,3 si las enzimas requieren diversas temperaturas de la reacción, el comienzo con la enzima que requiere una temperatura más baja, después añade la segunda enzima e incuba en la temperatura más alta.

3. Escalamiento encima de la reacción de la digestión de la DNA del plásmido

[Nota]: Incubación en un termóstato del agua, termóstato del metal o termóstato de la arena. Aumente el tiempo de la incubación si el volumen total de la reacción excede el μL 20.

Número de sitios de reconocimiento en la DNA