2× mezcla principal azul del verde QPCR del universal GSK con el almacenador intermediario amarillo del dilución de la plantilla 40×

mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal con el almacenador intermediario del dilución de la plantilla 40×Yellow

Introducción de mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal:

Este producto es una solución de la mezcla preparada de antemano 2x para el qPCR usando método quimérico de la fluorescencia del verde I de GSK. El componente de la base, polimerasa de DNA de Taq, es una polimerasa de DNA calor-activada bloqueada por el método del anticuerpo, que puede inhibir con eficacia la amplificación no específica bajo condiciones de la baja temperatura. Mientras tanto, combinado con el almacenador intermediario de la reacción optimizó para el qPCR, la polimerasa de DNA de Taq es muy conveniente para la alta reacción del qPCR de la especificidad y de la sensibilidad. Una buena curva estándar se puede obtener en un área cuantitativa amplia, que es exacta, reproductiva y confiable para el análisis cuantitativo de los genes de la blanco. Al mismo tiempo, este producto contiene un tinte pasivo especial de la referencia de ROX que sea conveniente para el uso en todos los instrumentos del qPCR, y no hay necesidad de ajustar la concentración de ROX en diversos instrumentos. El tinte azul se añade en la mezcla preparada de antemano, que tiene el efecto del trazalíneas de añadir muestras, y el diluyente amarillo de la plantilla se proporciona al mismo tiempo. Cuando la plantilla se diluye con diluyente amarillo de la plantilla y añadió en la mezcla preparada de antemano azul de la reacción, los cambios del color del azul al verde, que puede desempeñar un papel del trazalíneas en la preparación del proceso del sistema de reacción y prevenir salida o el misaddition. Los espectros de los tintes azules y amarillos no coinciden con los tintes del qPCR y no afectan a los resultados de la reacción.

Información de producto de la mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal:

Condiciones del almacenamiento y de dirección con la mezcla principal verde azul del qPCR 2×Universal con el almacenador intermediario del dilución de la plantilla 40×Yellow:

Transporte mojado del bolso de hielo; Almacenado en la temperatura de -20℃, válida por 12 meses.

Protocolo/procedimientos del análisis:

1. Dilución (opcional) de la plantilla de la mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal:

Este equipo proporciona un almacenador intermediario AMARILLO del dilución de la plantilla 40x, un dilución amarillo diluido 40 dobleces de la plantilla que se pueda utilizar para determinar exactamente si la plantilla ha sido añadida al líquido de la reacción del qPCR cambiando el color del líquido. Tomar el sistema de reacción del qPCR 20ul como un ejemplo, según la cantidad de la plantilla del dilución añadió en la solución de la reacción del qPCR 20ul, el método correspondiente del dilución de la plantilla original se puede referir la tabla siguiente (que lleva la plantilla original diluida 100ul como un ejemplo):

Ejemplo:

2ul diluyó la plantilla se debe añadir al sistema de reacción del qPCR 20ul.

Tomando el sistema del dilución de la plantilla 100ul como un ejemplo, cuando el volumen original de la plantilla es 20ul, se añade el almacenador intermediario amarillo del dilución de la plantilla de 25ul 40x, y entonces el agua Nucleasa-libre 55ul se añade al volumen total de 100ul.

El ALMACENADOR INTERMEDIARIO AMARILLO del DILUCIÓN de la PLANTILLA 40x ahora es 10x. Añada 2ul de la plantilla diluida en un almacenador intermediario del dilución del dilución 20ul, y el almacenador intermediario final del dilución de la plantilla del AMARILLO 40× es 1x. En conclusión, el almacenador intermediario amarillo del dilución de la plantilla debe ser 1x en el sistema final del qPCR.

Nota: Si la plantilla no necesita ser diluida, o si el diluyente de la plantilla de G3362-2 no se utiliza, usted puede ignorar este paso.

2. Recomiende el sistema de reacción del qPCR sobre la mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal::

a. Generalmente, un buen efecto de la amplificación se puede obtener con la concentración final de 0.2um. Cuando el funcionamiento de la reacción es pobre, la concentración de la cartilla se puede ajustar en el rango de 0.2-1.0um.

b. La cantidad de adición de la plantilla varía con el número de copia del gen de la blanco en la solución de la plantilla, y la cantidad apropiada de adición de la plantilla es discutida por el dilución de la pendiente. La mejor cantidad de la adición de DNA de la plantilla en el sistema de reacción 20ul era menos de 100 ng. Cuando el cDNA (solución de la reacción del RT) de la reacción de RT-PCR fue utilizado como plantilla, la cantidad de la adición no debe exceder el 10% del volumen total de solución de la reacción de la polimerización en cadena.

3. Procedimiento de la reacción de la polimerización en cadena (puede ser ajustado según los instrumentos):

a: Si la especificidad de la amplificación necesita ser mejorada, la temperatura del procedimiento de dos etapas o del recocido puede ser utilizada; Para mejorar la eficacia de la amplificación, un procedimiento del tres-paso o un rato de la extensión puede ser utilizado.

Nota:

1. Lleve por favor los guantes disponibles durante la operación para evitar la contaminación de la ARNasa.

2. Los productos reversos de la transcripción se pueden almacenar en -20℃ por poco tiempo. Si el almacenamiento de larga duración es necesario, se recomienda para almacenarlos en -80℃ después de embalar para evitar ciclos hielo-deshielo repetidos.

3. Si la plantilla está de origen eucariótico, se recomienda para seleccionar (despegue) la cartilla oliga 18 y la empareja con el 3' polivinílico una cola del mRNA eucariótico para obtener la producción más alta de cDNA integral.

4. Para la transcripción reversa del ARN procariótico, la cartilla o Gene Specific Primer al azar de Hexamer debe ser utilizada.

5. La cartilla al azar de Hexamer tiene aplicabilidad amplia y es conveniente para el mRNA, el rRNA, el tRNA, el pequeño ARN y las plantillas del lncRNA.

6. Si la transcripción reversa es seguida por análisis del qPCR, (despegue) la cartilla oliga 18 y la cartilla al azar de Hexamer se pueden mezclar para hacer eficacia de la síntesis del cDNA en todas las regiones de mRNA lo mismo, que ayuda a mejorar la autenticidad y la repetibilidad de resultados cuantitativos.

7. Si las cartillas subsiguientes del qPCR se diseñan a través de exones, el paso del retiro del genoma puede ser omitido.

Principios de diseño de la cartilla:

1. La longitud del producto de la amplificación se recomienda para estar entre el punto de ebullición 80-300;

2. Longitud de la cartilla: 18-25 punto de ebullición;

3. El contenido de la base G+C en cartillas debe estar entre 40%-60%;

4. La diferencia del valor de TM entre las cartillas delanteras y las cartillas reversas es menos que 2℃, y el valor de TM entre 58-62℃ es el mejor;

5. Aleatoriedad de la distribución baja;

6. Las cartillas no deben contener secuencias uno mismo-complementarias, si no formarán una estructura secundaria de la horquilla;

7. Debe haber no más que 4 complementarios o las bases homólogas entre dos cartillas, si no el dimero de la cartilla será formado, especialmente coincidencia complementaria en el 3' extremo;

8. El 3' base terminal de la cartilla se sugiere para ser G o C;

9. No se encontró ningunos otros productos no específicos en resultados de la comparación de NCBI.

Problemas comunes y soluciones:

Si usted necesita más información sobre la mezcla principal GSK del qPCR azul del verde de 2×Universal con el almacenador intermediario del dilución de la plantilla 40×Yellow, por favor sepamos en línea, gracias.